發布日期：2022-10-09 點擊率：74
微量分光光度計能夠快速準確的定量檢測核酸、蛋白質等溶液。具有使用方便、消耗樣品少(僅2μl)、不用預熱、能迅速清理殘留樣品、不需要比色皿或其它樣品定位裝置、樣品不需要稀釋等特點，常用于核酸，蛋白定量以及細菌生長濃度的定量，目前已成為眾多實驗室的常規儀器。
工作原理
超微量分光光度計進行濃度測定的原理是根據朗伯-比爾（Lamber-Beer）定律，A＝K·C·L 式中，A為吸光度；K為吸（消）光系數；C為溶液的濃度；L為液層厚度。此公式說明：在入射光一定時，溶液的吸光度與溶液的濃度及液層厚度成正比。此式就是光的吸收定律的數學表達式，又叫朗伯-比爾定律。
核酸定量
核酸的定量是超微量分光光度計使用頻率最大的功能。可以定量測定溶于緩沖液的寡核苷酸，單鏈、雙鏈DNA以及RNA含量。這是由于核酸、核苷酸及其衍生物都具有共軛雙鍵，具有紫外吸收的特性，最大的吸收波長在260nm，吸收波谷在230nm。
除了核酸濃度，分光光度計同時顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度，如A260/A280的比值，用于評估樣品的純度，因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品，比值大于1.8（DNA）或者2.0（RNA）。如果比值低于1.8 或者2.0，表示存在蛋白質或者酚類物質的影響。A230表示樣品中存在一些污染物，如碳水化合物，多肽，苯酚等，較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。
蛋白質直接定量
這種方法是在280nm波長，直接測試蛋白。蛋白質直接定量方法，適合測試較純凈、成分相對單一的蛋白質。紫外直接定量法相對于比色法來說，速度快，操作簡單；但是容易受到平行物質的干擾，如DNA的干擾；另外敏感度低，要求蛋白的濃度較高。
比色法蛋白質定量
蛋白質通常是多種蛋白質的化合物，比色法測定的基礎是蛋白質構成成分：氨基酸（如酪氨酸，絲氨酸）與外加的顯色基團或者染料反應，產生有色物質。有色物質的濃度與蛋白質反應的氨基酸數目直接相關，從而反應蛋白質濃度。
比色方法一般有BCA，Bradford，Lowry 等幾種方法。
與傳統分光光度計相比，超微量分光光度計要求的樣品體積小，不需要比色皿，比色杯清洗方便，只需用干凈的吸水紙將樣品從檢測平臺上擦拭干凈即可。除此之外，實驗過程也更為簡單，不需預熱，可隨時檢測，檢測結果顯示吸光度值的同時，程序直接給出濃度值。超微量分光光度計與傳統相比，體積更小，更方便使用。
標簽: 微量分光光度計
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